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Die Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) ist ein Werkzeug zur Trennung von Substanzen aus einem Gemisch. Die Trennung und Identifizierung bestimmter Chemikalien erfolgt hauptsächlich in der Chromatographiesäule des Systems. Für CLAE stehen viele Spaltentypen zur Verfügung, die jeweils für einen bestimmten Analysetyp verwendet werden. Die C18-Säule ist die stärkste unpolare Säule, die allgemein verwendet wird. Nach kontinuierlicher Verwendung über einen längeren Zeitraum nimmt die Fließgeschwindigkeit des Lösungsmittels ab und die Analysezeit nimmt zu. Eine weitere Ursache für die Verkürzung der Analysezeit sind Proben, bei denen geringe Mengen chemischer Substanzen im Säulenmaterial verbleiben, wodurch die Fähigkeit zur Trennung verringert wird. Die Wiederherstellung seiner Oberfläche kann durch Behandeln des Materials mit einer Reihe spezifischer Lösungsmittel erfolgen, um es von verbleibenden Proben zu reinigen und das Trägermaterial zu revitalisieren.
Schritt 1
Entfernen Sie die Säule C18 aus der Durchflussrichtung und platzieren Sie sie in der entgegengesetzten Richtung. Wenn das Lösungsmittel zurückgeführt wird, wird der im Laufe der Zeit auftretende Akkumulationseffekt gemindert. Es muss darauf geachtet werden, dass sich am Ende der Säule nicht zu viel Material ansammelt. Einige Fabriken verwenden oben ein größeres Netz, sodass sich das Netz an der darunter liegenden Position befindet, wenn sich die Strömungsrichtung ändert. Diese Methode der Wiederherstellung wird als Flussumkehr bezeichnet. Um zu verhindern, dass Ablagerungen zum Systemdetektor fließen und möglicherweise ein Hindernis verursachen, lassen Sie ihn ohne angeschlossenen Detektor funktionieren und leiten Sie den Fluss von der Säule zur Entsorgung.
Schritt 2
Platzieren Sie das Lösungsmittelkanal in einer Reihe von Lösungsmitteln, um alle in der Säule zurückgehaltenen Verbindungen in entgegengesetzter Richtung zu eluieren. Diese Lösungsmittel variieren in ihren hydrophilen Eigenschaften. Indem Sie sie variieren, eluieren Sie Verbindungen gleicher hydrophiler Natur. Verwenden Sie nacheinander jeweils 50 ml der folgenden Lösungsmittel: Wasser (wenn Sie einen Puffer verwenden), Methanol, Isopropanol, Dichlormethan, Hexan, Dichlormethan und Isopropanol.
Schritt 3
Setzen Sie die Säule wieder in die richtige Richtung ein und lassen Sie Ihr Lösungsmittel durch sie fließen. Verwenden Sie mindestens 75 ml, um es zu waschen, bevor Sie fortfahren. Testen Sie es mit einem Muster, das Sie verwendet haben, als es neu war, und überprüfen Sie die Ergebnisse. Achten Sie beim Erreichen der maximalen Aufbewahrungspunkte und der gesamten Analysezeit. Der Grad, in dem diese Attribute mit dem ursprünglichen Test übereinstimmen, als er noch neu war, gibt den Grad an, in dem die Spalte wiederhergestellt wurde. Wenn die Ergebnisse nicht zufriedenstellend sind, ersetzen Sie die Säule durch eine neue und werfen Sie die alte weg.
