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Die Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) ist eine gängige Methode der Laboranalyse, bei der eine Probe beim Durchgang durch eine Säule in ihre chemischen Komponenten getrennt wird. Diese Säule ist mit einem porösen Material gefüllt, typischerweise Kieselgel. Eine Standard-Umkehrphasensäule wie C8 kann manchmal verstopfen oder kontaminiert werden. Diese Spalten können mit sehr einfachen Techniken abgerufen werden.
Anweisungen
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Deaktivieren Sie die Säule und kehren Sie ihre Position um, so dass die mobile Phase jetzt durch den normalerweise von der Säule ausgegebenen Anteil eintritt. Befestigen Sie einen Auslass am anderen Ende der Säule (der ursprüngliche Eingang) und lassen Sie ihn in einen Auslass abtropfen.
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Pumpen Sie eine Reihe von Lösungsmitteln in absteigender Polarität. Eine empfohlene Basisserie ist, mit Methanol zu beginnen, dann auf Acetonitril zu wechseln, dann auf Acetonitril / Isopropanol (75:25), Isopropanol, Methylenchlorid und Hexan. Wenn die mobile Phase in der Kolonne saugfähig war, wird eine Passage mit Wasser vor der Verwendung in Methanol empfohlen. Ein Fluss von ein bis zwei Millilitern pro Minute ist ausreichend, und ungefähr zehn Volumensäulen jedes Lösungsmittels sollten gepumpt werden. Die Volumensäule ist der Innenraum der Säule und wird berechnet aus (0,7 × pi x (DI / 2) 2 × L), wobei DI der Innendurchmesser der Säule und L die Länge ist.
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Pumpen Sie weitere zehn Volumina Isopropanol durch die Säule, um sie für die Verwendung mit der ursprünglichen mobilen Phase vorzubereiten. Wenn die ursprüngliche mobile Phase abgefedert wurde, pumpen Sie nach dem Isopropanol auch Wasser durch die Säule, bevor Sie zur ursprünglichen mobilen Phase zurückkehren.
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Lösen Sie die Säule, kehren Sie sie um und rasten Sie sie wieder ein, sodass sie sich in ihrer ursprünglichen Position befindet (sodass die bewegliche Phase auf die rechte Seite der Säule eintritt). Verbinden Sie den Lautsprecherausgang erneut mit dem Detektor.
Wiederherstellen der Säule
Wie
- Wenn dieses Verfahren die Säule nicht gründlich reinigt, kann eine 50: 50-Mischung von Dimethylsulfoxid (DMSO) und Dimethylformamid (DMF) verwendet werden. Rückstände von Proteinen und Metallionen können andere Arten von Lösungsmitteln erfordern, wie z. B. ionenschonende Reagenzien oder eine Lösung von Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA).
Hinweis
- Bei einigen Geräten hat der Rücken ein grobes Metallsieb als Einlass. In diesem Fall kann durch das Umkehren der Säule die stationäre Phase die Säule verlassen. Dies wird nicht empfohlen. Wenden Sie sich an Ihren Händler, wenn Sie sich nicht sicher sind.
- Das in diesem Verfahren verwendete Lösungsmittel ist potentiell toxisch, wenn es aufgenommen und eingeatmet wird. Bei der Handhabung die üblichen Vorsichtsmaßnahmen für das Labor verwenden.
Was du brauchst
- HPLC-Gerät
- Wasser
- Methanol
- Acetonitril
- Isopropanol
- Methylenchlorid
- Hexan
